Wide field

Technik

In der Weitfeldfluoreszenzmikroskopie wird das gesamte Sichtfeld mit Anregungslicht beleuchtet, das dann von einem Strahlteiler in den Strahlengang des Mikroskop reflektiert wird. Das Objektiv des Mikroskops funktioniert in diesem Layout als Kondensator. Bildinformationen (emittiertes Licht) werden vom Mikroskopobjektiv auf klassische Weise abgetastet. Das emittierte Licht muss den Strahlteiler passieren, der verwendet wurde, um das Anregungslicht in den Strahlengang zu reflektieren. Daher muss dieser Strahlteiler zu den Eigenschaften des untersuchten Fluorophors passen. Licht, das den Fluorophor anregen kann, muss reflektiert werden, während das emittierte Licht dieses optische Element passieren muss. Schließlich wird ein Fluoreszenzbild von einer Kamera aufgenommen. Die Technik ist beugungsbegrenzt und bietet keine optische Schnittbildung.

Nutzung

Erste Wahl für neue Proben. Relativ einfache Technik, die Bilder mit hoher Geschwindigkeit erstellt. Daten können quantitativ interpretiert werden. Abhängig von der Lichtquelle und vorhandenen Strahlteilern, können alle Fluorophore für Fluoreszenzmikroskopie benutzt werden. Mäßige Bleichwirkung und Phototoxizität.

Konfiguration

Manufacturer:

General Electric (GE)

Illumination:
Insight SSI (LED)

Optics:
60x1.42 oil-immersion objective PlanApo U (Olympus)
10x0.4 UPlanSApo (Olympus) temporary mounted in the STED microscope
4x0.13 UPlanFLN (Olympus)

Camera:
Photometrics Cool-Snap camera, 12 bit, 1024x1024 pixel

Filter:
Polychroic Beam Splitter (suitable for DAPI, FITC, RD-TR-PE, Cy5)
Filter EM457/50
Filter EM528/38
Filter EM617/73
Filter EM685/40
Filter EM360/40
Filter EM490/20

Filter EM555/28
Filter EM640/20
Polychroic Beam Splitter (suitable for DAPI, FITC, Alexa594, Cy5, GFP/mCherry)
Polychroic Beam Splitter (suitable for CFP/YFP/mCherry)
DAPI 435/48
CFP 475/24 GFP/FITC 525/48
YFP 548/22
TRITC 597/45
mCherry/Alexa594 625/45
Cy5 679/34 e imaging with the OMX.